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细胞培养瓶最新进展_细胞培养瓶密封盖和透气盖区别(2024年11月教程归档)

内容来源：莱茵河北极图库所属栏目：教程更新日期：2024-11-26

细胞培养瓶

细胞培养全攻略：准备工作与操作步骤细胞的生长方式大致可以分为三种：贴壁细胞、悬浮细胞和半悬浮细胞。不同类型的细胞有不同的处理方式，下面我们来详细讲解一下。准备工作 𐟧ꊥœ覭㥼开始培养之前，准备工作是必不可少的。你需要准备以下实验仪器和耗材：实验仪器：离心机、生物安全柜（使用前需用紫外照射30分钟）、水浴锅、电脑、显微镜实验耗材：离心管架、废液缸、T25细胞培养瓶、15ml离心管、巴氏吸管贴壁细胞的培养与复苏 ❤️ 复苏细胞：打开生物安全柜，让其运行5-10分钟，排净生物安全柜内的O3。准备15ml离心管，用5ml巴氏吸管吸10ml左右完全培养基。从干冰中取出细胞，放入水浴锅中快速转动1分钟左右，然后轻微晃动，观察是否解冻完毕。如果未解冻，继续在水浴锅中晃动；如果解冻完毕，用纸巾擦干，并喷洒75%酒精（注意不要让酒精喷洒在纸上，以免字迹消失）。将细胞拿到超净工作台，用巴氏吸管吸至预先准备好的离心管中，充分混匀后，800-1000rpm离心5-8分钟。弃掉上清液，用手指轻弹离心管底部，使沉淀散开。加5-6ml培养基重悬，然后加入培养瓶中。培养瓶上需注明细胞名称、培养条件、批号等信息。晃动使细胞散开，显微镜下观察后，置于37℃培养箱。传代细胞：将培养瓶中的培养基倒入废液缸。用2-3ml PBS涮洗2-3次。加入1ml 0.25%胰酶（贴壁不牢的细胞用0.05%胰酶），晃动瓶子使其均匀铺在T25瓶底壁，然后放入培养箱中计时3分钟（具体时间根据细胞类型略有差异）。消化时间到了后，显微镜下观察，细胞基本皱缩变圆。在操作台中加入3ml左右终止液，轻轻吹洗掉T25瓶底壁细胞，吸打混匀后吸入15ml离心管（提前写上细胞名字），1000rpm、5分钟离心。离心完毕后，去上清液，将底部沉淀弹散，根据细胞生长速度和实验进度，传适量于新的瓶子中即可。悬浮细胞与半悬浮细胞的培养 𐟌€ 悬浮细胞和半悬浮细胞的培养方式与贴壁细胞有所不同。具体操作可以参考相关文献或资料。小贴士 𐟓 某些贴壁细胞对DMSO敏感，复苏后可以直接将细胞置于T25培养瓶中，培养基可以适量多一些，第二天换液即可。不同细胞的消化时间可能会有所不同，操作前需查看说明书。希望这些信息对你有所帮助！

细胞标记必备：活细胞示踪剂使用指南最近发SCI论文真是越来越难了，没有几张亮眼的图片根本没法在一区发表。今天给大家介绍一个超级实用、操作简便的论文出图神器——活细胞示踪剂（论文里写作celltracker）。活细胞示踪剂可以用绿色荧光或红色荧光标记细胞，而且荧光能在七天内保持不淬灭。特别适合研究多种细胞共培养过程中，某种细胞的生长、分化和运动状态。比如你在水凝胶中培养细胞，但水凝胶透光率差看不清细胞，这时候就可以用示踪剂来标记观察。相比免疫荧光染色，操作步骤简单，成功率也高。新手也能一次成功！操作步骤我们用的是翌圣的CMFDA：用50ul DMEO溶解50ug CMFDA粉末，配成2mM的母液，然后存到-20度冰箱。使用时取出母液，放置五分钟化冻后，在离心机里离心3000转五分钟（这一步不能偷懒，不然母液会损失很多）。用DMEM或其他无血清培养基配置工作液。如果是细胞联系紧密的细胞系，比如HUVEC，工作液的比例是3ul母液+4ml DMEM。如果是细胞贴壁不牢（如231）或者细胞形态很长（如成纤维、成骨细胞），工作液比例是1ul母液+4ml DMEM。把配好的工作液加入T25细胞培养瓶中，37度孵育10分钟，镜下观察染色情况。孵育完成后用PBS清洗两遍，再37度孵育30分钟。注意事项工作液不要用PBS配，细胞会死很多。细胞最好长满一点再染色，活力会更好。工作液里母液浓度不要太高，孵育时间最好不要超过20分钟，不然细胞很容易挂掉（别问我为什么知道）。如果你在透光性不好的凝胶里养细胞，最好用共聚焦拍照。翌圣家还有一款红色的示踪剂，普通显微镜拍不到，只能用共聚焦拍。如果你有钱，也可以用赛默飞的产品，据说效果更好。最后提醒一下，活细胞示踪剂的结果不能代替免疫荧光的结果，如果需要做免疫荧光的朋友们不能偷懒哦！额外推荐我最近正在便宜出一些细胞，有HUVEC、231、HFOB1.19、HMCAF（人乳腺癌成纤维细胞），有需要的朋友可以联系我哦！希望这篇指南能帮到大家，祝大家科研顺利，论文多多！𐟒ꀀ

t25细胞培养瓶 𐟌€ 补液法：每2到3天，根据培养容器和原有细胞悬液体积，适量补充新鲜培养基。例如，T25瓶每次补液1到2毫升即可。对于NK-92细胞，还需同时补充200 U/ml的IL-2。补液2到3次后，进行一次全面的离心换液。 𐟔„ 半换液法：以T25瓶为例，瓶中装有5毫升培养基。首先，竖起瓶子并静置一段时间，轻拍瓶身使细胞团浮起。待细胞沉底后，小心吸出2.5毫升上清液，转移到离心管中。离心1000rpm 3到5分钟，离心后的沉淀用2.5毫升新鲜培养基重悬，然后放回原瓶继续培养。 𐟔 细胞生长观察：细胞生长时，聚集的细胞团会逐渐增大。正常的细胞团在显微镜下呈现透亮状。若细胞聚集过多，出现细胞团中部发暗时，可以进行传代操作。

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

CCK-8实验指南：悬浮细胞篇 𐟧ꠥꌥ‡†备在进行实验前，确保你准备好以下物品：超净台、完全培养基、96孔板、ep管、移液枪及枪头、细胞计数仪、培养箱、显微镜和酶标仪等。 𐟔⠧쬤𘀦�𜚧𛆨ƒž计数与悬液制备首先，使用细胞计数仪计算细胞数量，并制备细胞悬液。将培养瓶中的细胞转移到ep管中，离心（900rpm，5min）后去除上清液。使用1ml培养基重悬细胞，取10微升进行计数。根据计数结果，制备所需浓度的细胞悬液。 𐟓Š 第二步：细胞铺板与接种在96孔板的最外围加入100微升PBS，以减少边缘挥发效应对实验数据的影响。将细胞悬液按照空白孔、对照孔、低浓度至高浓度的顺序加入到96孔板中，每个浓度设置6个复孔。空白孔中加入100ul培养基，对照孔中不加药物。 𐟕𐯸 第三步：孵育将铺好细胞的96孔板放入培养箱中，孵育24小时或48小时，具体时间根据细胞密度进行调整。 𐟒Š 第四步：加药设置浓度梯度，将药物加入到相应的孔中。例如，在序号为2345678的ep管内分别加入800ul培养基，在序号为9的ep管内加入药物，然后转移到8号管中，依次类推，直至得到所需浓度的药物。将左侧的空白孔和对照孔内分别加入100ul的空白培养基。 𐟕𐯸 第五步：再次孵育加药后，将96孔板放入培养箱中，继续孵育24小时或48小时。 𐟓Š 第六步：加入CCK-8并测量OD值在避光条件下，使用电枪设置好20ul参数后，每孔加入20ulCCK-8（浓度为10%）。加完后放入培养箱中等待4小时，然后使用酶标仪测量OD值（避光进行）。通过以上步骤，你就可以完成CCK-8实验，了解药物对悬浮细胞的影响啦！𐟎‰

𐟧짻†胞培养瓶的TC处理全解析 𐟔TC处理，即“tissue culture”的缩写，是一种专门针对细胞培养瓶的特殊处理技术。 ✨它的主要目的是为了增强细胞的附着和增殖能力，从而提升细胞生长的质量和实验的可靠性。 𐟒ᔃ处理通常包括以下关键步骤： 1️⃣ 表面涂层：通过涂聚-L-赖氨酸或胶原蛋白等物质，来增加细胞培养瓶表面的黏附力，帮助细胞更好地附着。 2️⃣ 灭菌处理：利用高温蒸汽灭菌或紫外线照射等方式，确保细胞培养瓶的无菌状态，为细胞的生长提供一个干净的环境。 3️⃣ 预涂膜处理：这一步是为了提供细胞生长的支持和信号传导，进一步优化细胞的生长效率。 𐟎‰通过这一系列精细化的处理步骤，TC处理能够显著提升细胞培养的质量和实验的准确性，对于需要长期培养或细胞扩增的实验来说尤为重要！

AGS人胃腺癌细胞培养全攻略𐟓–✨ 𐟔젧瑧 ”新手们，欢迎来到细胞培养的世界！今天，我们将带你一步步了解AGS人胃腺癌细胞的培养过程，让你的科研之旅更加顺畅。 𐟧ꠦ料与仪器准备： AGS人胃腺癌细胞系 DMEM高糖培养基羊血清青霉素/链霉素无菌PBS缓冲液 1% 波洛克霉素无菌离心管、细胞培养瓶、转移管、吸管、移液枪超净工作台 CO2培养箱倒置显微镜甲醇、乙醇、果糖、氯化钠、甲基红、尼龙网袋、培养皿等 𐟔堥ꌦ�ꤦ奕毼š 1️⃣ 细胞培养瓶消毒：把细胞培养瓶泡在70%乙醇或含0.1%甲醛的70%乙醇中20-30分钟，然后放在超净工作台内自然风干。不用时尽量保存在超净工作台内哦。 2️⃣ 培养基制备：DMEM高糖培养基里加10%羊血清和1%青霉素/链霉素，过滤后冷藏保存。用之前在37℃水浴中回温到室温。 3️⃣ 细胞解冻：从液氮罐里取出AGS细胞，迅速放入CO2培养箱，停留10-15分钟。然后室温下慢慢滴加3-5 mL DMEM高糖培养基，再加1%波洛克霉素，混匀。 4️⃣ 细胞培养：把细胞均匀铺在50ml细胞培养瓶里，加入10ml DMEM高糖培养基，PH值7.2-7.4，细胞密度0.2㗱06/mL。放在含5% CO2的37℃培养箱里培养，观察细胞贴附情况。 5️⃣ 细胞分裂和传代：当细胞密度达到60-70%时，用1%液体消化酶溶解细胞贴壁，离心后取上清90%，加1ml DMEM高糖培养基，细胞密度维持在0.2㗱06/mL。 6️⃣ 细胞数量计数：取出少量培养细胞，用比色计或倒置显微镜计数，为后续操作做准备。 7️⃣ 细胞冻存：用冻存液将有活力的细胞保存在液态氮中。 8️⃣ 细胞实验：根据实验需求，将细胞分别培养在不同的试验环境中进行检测。 𐟓 在实验过程中，记得严格把控细胞的密度和培养条件哦，这样才能保证实验结果的准确性。祝你科研顺利！𐟎‰

细胞培养瓶：T25、T75透气型详解 𐟧슧𛆨ƒž培养是个精细活，选对工具至关重要。今天我们来聊聊那些在实验室里常见的T25和T75透气型细胞培养瓶。细胞培养瓶的分类 𐟓 细胞培养瓶的种类繁多，主要根据细胞培养面积、材质、底部形状和容积来区分。比如，细胞培养面积有25cmⲣ€75cmⲥ’Œ175cmⲤ𘉧獯𜛦质方面，有玻璃和塑料两种选择；底部形状则有正方形、长方形和三角形等；容积从5ml到500ml不等。产品特性 𐟌Ÿ 透明度高：这些培养瓶采用优质聚苯乙烯材质制成，透明度高，刻度线清晰，方便实验观察。细胞培养面积选择：有T25 cmⲣ€T75 cmⲣ€T175 cmⲤ𘉧獧𛆨ƒž培养面积可选。真空等离子处理：产品经过真空等离子处理（TC处理），确保细胞均匀生长。盖子类型：分为密封盖和滤膜盖（透气盖）两种类型，适用于不同培养环境。密封性：密封盖可将细胞和组织培养的培养环境与外界完全隔离，有效防止污染。滤膜盖设计：滤膜盖设计便于内外气体交换，有效防止污染。人体工学设计：短而宽的瓶颈设计，方便移液管和细胞铲的出入。无菌包装：电子速灭菌处理，无菌包装，严格气密性测试，无热源、无内毒素，安全环保。透气孔设计：细胞瓶底部支撑留有透气孔，有利于培养箱内部气体快速进入细胞瓶周围，缩短细胞瓶从常温环境移入的回温时间。总结 𐟓 无论是科研还是教学，选择合适的细胞培养瓶都至关重要。T25和T75透气型细胞培养瓶以其优秀的性能和人性化的设计，成为了实验室里的得力助手。希望这篇文章能帮到你，让你在选择细胞培养瓶时更加得心应手！

𐟧샡co-2细胞培养全攻略✨ 𐟔쥟𙥅𛥟𚥇†备： - 78% MEM培养基 - 20% 胎牛血清（FBS） - 1% 青霉素-链霉素（P/S） 𐟒‰清洗步骤： 1️⃣ 用酒精擦拭台面，取出细胞。 2️⃣ 镜下观察细胞密度达70%-80%。 3️⃣ 用真空泵吸出培养液，PBS清洗。 𐟌᯸消化过程： 1️⃣ 加入适量胰酶。 2️⃣ 放入培养箱，等待2-3分钟。 3️⃣ 观察细胞消化情况，准备离心。 𐟔„离心操作： 1️⃣ 加入完全培养基终止消化。 2️⃣ 轻轻吹打细胞，避免力度过大。 3️⃣ 将细胞悬液加入离心管，平衡后离心。 𐟌𑤼 代技巧： 1️⃣ 观察离心后细胞分布。 2️⃣ 轻柔吹打细胞悬液。 3️⃣ 根据传代比例，缓缓注入细胞。 4️⃣ 轻轻晃动培养瓶，使细胞分布均匀。 5️⃣ 放置于37℃，5%二氧化碳培养箱中培养4-8小时。 𐟒ᥰ贴士：操作过程中注意无菌操作，避免污染。定期检查培养箱环境，确保细胞生长最佳条件。

细胞实验的基本操作与注意事项 𐟧슧𛆨ƒž实验是生物学研究的基础，掌握一些基本操作和注意事项非常重要。下面我们来聊聊细胞复苏、冻存和传代的基本步骤以及一些需要注意的地方。细胞复苏 𐟌Š 细胞复苏其实是个技术活，步骤如下：从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，时间最好控制在1分钟内。解冻后，1000rpm，4℃，离心5分钟。弃去上清液，用完全培养基重悬细胞沉淀。将细胞转移到培养瓶中，轻轻晃动使细胞分布均匀，并做好标记。在显微镜下观察细胞密度和形态，然后放入二氧化碳培养箱培养。注意事项：从液氮罐中取细胞时，记得做好个人防护，别被冻伤了。如果冻存细胞不能立即水浴解冻，可以放在干冰上保存转移。水浴解冻时间要快，做到慢冻速融。解冻后的细胞别在常温下放太久，尽快离心去除DMSO或细胞冻存液。刚复苏的细胞贴壁不牢，24小时内别频繁观察和换液。将培养瓶放入培养箱时，把瓶盖旋松一点，以便气体交换（如果用透气性瓶盖，就不用旋松瓶盖了）。细胞冻存 ❄️ 细胞冻存是为了长期保存细胞，步骤如下：等细胞达到80-90%的密度时，用胰酶消化1-2分钟。用完全培养基（胰酶体积的2倍）终止消化，1000rpm，4℃，离心5分钟。弃去上清液，加入冻存液重悬细胞。进行梯度降温，最后转移到液氮罐或-80℃冰箱保存。注意事项：选取对数生长期的细胞进行冻存，这时候细胞状态最好。冻存的细胞不宜长期放在-80℃环境中，尽快转入液氮罐中。冻存后取出一管复苏，检测细胞存活率。理论上细胞可以在液氮中长期保存，但为了稳妥起见，半年后复苏培养一次，观察生长情况再继续冻存。不同冻存液的冻存方式不一样，具体详见说明书。细胞传代 𐟧슊细胞传代是为了扩大培养规模，步骤如下：移除原液，用PBS清洗1-2次。用胰酶消化1-2分钟，完全培养基终止消化。吹散细胞，1000rpm，4℃，离心5分钟。弃去上清液，用完全培养基重悬细胞。将细胞转移到新的培养瓶中，补充完全培养基。在显微镜下观察细胞密度和形态，然后放入二氧化碳培养箱培养。注意事项： PBS润洗细胞时，从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入PBS，避免冲刷到细胞层。不同细胞的胰酶消化时间不一样，每30秒观察一次。悬浮细胞需要用未经TC处理的细胞瓶或培养皿培养，如悬浮细胞无碎片，建议按方法一传代。细胞的居住环境 𐟏 舒适无菌的环境是细胞健康生长的重要基础。不同形状、规格的培养瓶、培养皿和培养板，最终都会被转移到37℃，5%CO2的恒温培养箱中。希望这些基本操作和注意事项能帮到你，祝你的细胞实验顺利！𐟒ꀀ

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